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本试剂盒用于提取表达蛋白的不溶性聚集体即包涵体蛋白，筛选克隆大肠杆菌在包涵体中表达的重组蛋白。溶解的蛋白可用于后续实验，如重折叠，SDS-PAGE，Western Blots，2-D凝胶电泳酶分析。

在大肠杆菌中表达过量的外源蛋白通常会形成包涵体，该试剂盒裂解细菌后，采用一定的去污剂洗涤包涵体，去除大部分包裹在内的细胞组分，包括细胞膜、DNA、RNA、核糖体和其他细菌蛋白组分等。最终通过高浓度变性剂溶解包涵体。

• 在4℃下进行步骤1和步骤2。
  
• 不同蛋白可能需要不同的步骤，成功重折叠的变性蛋白质可以完全依赖于步骤进行，几种技术如稀释，透析和凝胶色谱法可用于重折叠变性蛋白质。对其他重折叠蛋白的步骤，请参见参考文献。对于不同蛋白使用相差显微镜来检测大肠杆菌是否彻底裂解，因为完整的细胞会降低蛋白质的纯度。
  
• 虽然蛋白质存在于包涵体中，但在某些情况下上清中仍然有大量的蛋白质，因此可以检测上清液。
  
• 用6M盐酸胍代替尿素，可以得到更好的效果
  
• 使用GSH/GSSG系统和分子伴侣，配体，底物等小分子能够提高复性产率。
  
• 处理100×Protease Inhibitor时需要小心操作，佩戴防护眼镜和手套，因为其对健康有害，毒性非常大，对眼睛和皮肤有刺激性作用。

• 在预先称重的离心瓶里，将1L表达目的蛋白的大肠杆菌细胞培养物在4℃，5000g离心15分钟。
  
• 去除上清液并确定大肠杆菌沉淀的重量。每克(湿重)大肠杆菌，加入3mL 细胞裂解缓冲液I，通过温和的涡旋或用抛光的玻璃棒搅拌重悬，此操作应保持在4℃温度下。
  
• 每克大肠杆菌，加入4μL 100×Protease Inhibitor和80μL 溶菌酶，将悬浮液在37℃下搅拌20分钟。
  
• 继续搅拌，每克大肠杆菌加入80μL 脱氧胆酸。
  
• 将悬浮液保存在37℃，并用玻璃棒偶尔搅拌一次。当裂解液变粘时，每克大肠杆菌加入20μL DNase I。
  
• 将裂解液放置在室温下，直至不再粘稠(约30分钟)。
  
• 纯化和洗涤包涵体。
  
  • 在离心管中，将细胞裂解物在4℃，12830g离心15分钟。
    
  • 去除上清液，在4℃环境下，预估沉淀体积，加入9倍沉淀体积细胞裂解缓冲液II重悬。
    
  • 将悬浮液在室温下放置5分钟。
    
  • 将离心管中的悬浮液在4℃环境下，12830g离心15分钟。
    
  • 去除上清液并保留用于下一步。将沉淀物重悬于100μL的H2O中。
    
  • 各取10μL上清液和悬浮颗粒样品，将每个样品用2×SDS loading buffer稀释成20μL进行SDS-PAGE电泳，以验证目的蛋白存在位置。
• 溶解包涵体：
  
  • 将步骤7中的重悬浮颗粒放入离心管中在4℃，以12830g离心15分钟，然后将沉淀物悬浮于1mL的1×IB溶解缓冲液I (用去离子水将10×IB溶解缓冲液I稀释成1×IB溶解缓冲液I)中(使用前加入0.48g尿素和10μL 0.1M PMSF或100×Protease Inhibitor)。
    
  • 室温下保存1小时。
    
  • 将该溶液加入到9倍体积的1×IB溶解缓冲液II (用去离子水将5×IB溶解缓冲液II稀释成1×IB溶解缓冲液II)中，并在室温下孵育混合物30分钟。取一点小样在pH试纸上检查pH值是否保持在10.7，如有差别可以用KOH调整。
    
  • 用12M HCl将溶液的pH调至8.0，然后至少在室温下保存30分钟。
    
  • 将溶液倒入离心管中在室温下以12830g离心15分钟。
    
  • 去除上清液并保留用于下一步。将沉淀重悬于100μL 1×SDS loading buffer中。
    
  • 分别取10μL上清液和重悬的颗粒样品，与10μL 2×SDS loading buffer混合。通过SDS-PAGE分析两个样品以确定溶解度。